Xét nghiệm ELISA phát hiện nhiều bệnh, đó là lý do tại sao nó được ứng dụng rộng rãi trong y học và hơn thế nữa. Tuy nhiên, xét nghiệm ELISA được biết đến nhiều nhất để chẩn đoán bệnh Lyme. Bài kiểm tra ELISA là gì? Làm thế nào để giải thích kết quả? Giá của bài kiểm tra là bao nhiêu?
Mục lục:
- Kiểm tra ELISA - nó phát hiện những gì? Ứng dụng của bài kiểm tra ELISA
- Kiểm tra ELISA - xét nghiệm là gì?
- Xét nghiệm ELISA và bệnh Lyme - thực hiện khi nào?
- Kiểm tra ELISA - giá cả. Chi phí xét nghiệm ELISA là bao nhiêu?
- Kiểm tra ELISA - kết quả. Chúng có thể là dương tính giả không?
- Kiểm tra ELISA - kết quả. Chúng có thể là âm tính giả?
Xét nghiệm ELISA, tức là xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym, là một phương pháp phòng thí nghiệm thường được sử dụng để phục vụ, trong số những phương pháp khác, để phát hiện định lượng các kháng thể trong máu.
Vì lý do này, xét nghiệm ELISA đã được ứng dụng trong chẩn đoán các bệnh do vi khuẩn, chẳng hạn như bệnh Lyme.
Ưu điểm của phương pháp ELISA là tính đơn giản và khả năng thực hiện nhanh chóng cũng như độ nhạy cao. Phương pháp ELISA được thực hiện bằng cách sử dụng các đĩa nhựa đặc biệt có các giếng chứa đầy ví dụ như protein Borrelia (kháng nguyên) và các kháng thể đơn dòng cụ thể, được thiết kế để phát hiện các kháng thể trong mẫu của bệnh nhân.
Kiểm tra ELISA - nó phát hiện những gì? Ứng dụng của bài kiểm tra ELISA
Độ nhạy cao và tính đơn giản của phương pháp ELISA đã làm cho nó được áp dụng trong chẩn đoán nhiều bệnh, nhưng nó được biết đến nhiều nhất là phương pháp chẩn đoán bệnh Lyme.
Trong trường hợp chẩn đoán Lyme borreliosis, cái gọi là ELISA gián tiếp, cho phép phát hiện IgM hoặc IgG cụ thể trong vật liệu được thử nghiệm. Theo cách tương tự, các kháng thể có thể được phát hiện để chẩn đoán:
- nhiễm virut: virut herpes (virut herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, virut viêm gan (HBV và HCV)
- nhiễm trùng đơn bào: toxoplasmosis, giardiasis
- bệnh tự miễn dịch: bệnh celiac (kháng thể kháng tTG hoặc kháng DPG), bệnh Hashimoto (kháng thể kháng TG và chống TPO), bệnh viêm ruột (kháng thể kháng ASCA và kháng ANCA)
- bệnh ký sinh trùng và dị ứng trong đó kháng thể IgE đặc hiệu được phát hiện. Mức độ gia tăng của chúng có thể cho thấy sự hiện diện của dị ứng, ví dụ như phấn hoa và thức ăn, hoặc sự xâm nhập của ký sinh trùng (sán dây có vũ trang, giun đũa người)
Ngoài ra còn có những sửa đổi đối với phương pháp ELISA (cái gọi là ELISA bánh mì), cho phép phát hiện một mẫu protein không phải là kháng thể. Sau đó, mục đích của thử nghiệm là phát hiện trong vật liệu sinh học:
- các mảnh vi rút hoặc vi khuẩn, thường chúng là các kháng nguyên đặc trưng cho một mầm bệnh nhất định
- nội tiết tố huyết thanh, ví dụ như estrogen, prolactin, TSH, fT4, cortisol
- các enzym, ví dụ như calprotectin, elastase tụy, phosphatase kiềm
- dấu hiệu khối u, ví dụ: CA-125
- sự hiện diện của thuốc trong huyết thanh
Phương pháp này cũng có thể áp dụng trong ngành công nghiệp thực phẩm, nơi nó có thể phát hiện một lượng nhỏ chất gây dị ứng (ví dụ: sữa, đậu phộng), GMO hoặc độc tố trong thực phẩm.
Kiểm tra ELISA - nó là về cái gì?
Ví dụ, việc chẩn đoán bệnh Lyme bằng phương pháp ELISA bao gồm việc phát hiện các protein miễn dịch trong vật liệu sinh học - các kháng thể phát sinh trong quá trình phản ứng chống lại các kháng nguyên Borrelia.
Các kháng thể được kiểm tra ở hai lớp, IgM và IgG. IgM là những kháng thể đầu tiên xuất hiện trong cơ thể khi chúng tiếp xúc với vi khuẩn và chúng suy giảm theo thời gian.
Vị trí của chúng được đảm nhận bởi các kháng thể IgG bền bỉ hơn có thể tồn tại trong cơ thể vài chục năm.
Bằng cách này, sự hiện diện của vi khuẩn trong cơ thể được kiểm tra gián tiếp bằng cách phát hiện các kháng thể đặc biệt chống lại xoắn khuẩn Borrelia.
Các kháng thể ở các giai đoạn nhiễm trùng khác nhau có thể chống lại nhiều loại protein Borrelia. Ví dụ, ở giai đoạn đầu, nó là protein p41.
Trong giai đoạn sau, ngày càng nhiều protein bắt đầu xuất hiện, chẳng hạn như p21, p30, p39, p43. Đây là lý do tại sao chẩn đoán bệnh Lyme là vô cùng khó khăn.
Việc lựa chọn protein của vi khuẩn là vô cùng quan trọng để xét nghiệm có giá trị chẩn đoán cao. Do đó, thường quy trong chẩn đoán bệnh Lyme, các xét nghiệm ELISA thế hệ II hoặc III nên được sử dụng trong đó các bộ protein được lựa chọn để thu được kết quả đáng tin cậy nhất.
Xét nghiệm ELISA và bệnh Lyme. Làm khi nào?
Lyme borreliosis là một bệnh do vi khuẩn gây ra bởi vi khuẩn Borrelia burgdorferi và nhiều giống của nó.
Việc chẩn đoán căn bệnh này không đơn giản do sự phức tạp của phản ứng miễn dịch chống lại Borrelia và sự không hoàn hảo của các phương pháp trong phòng thí nghiệm.
Phương pháp phòng thí nghiệm được sử dụng phổ biến nhất là phương pháp ELISA có độ nhạy cao, phát hiện các kháng thể đặc hiệu chống lại các protein của vi khuẩn.
Trong chẩn đoán bệnh Lyme, phương pháp ELISA gián tiếp được sử dụng, trong đó các giai đoạn sau được phân biệt:
- ủ các giếng trên đĩa với vật liệu thu được từ bệnh nhân, ví dụ huyết thanh. Nếu có kháng thể chống lại Borrelia trong vật liệu được thử nghiệm, chúng sẽ gắn vào các protein ở đáy phản ứng tốt
- sau đó huyết thanh dư thừa được rửa sạch bằng chất lỏng rửa đặc biệt (đệm) và được gọi là cộng hợp, là một kháng thể liên kết với enzym liên kết với các kháng thể đã liên kết trước đó trong giếng phản ứng
- sau đó thêm chất nền cho cộng hợp và xảy ra phản ứng màu (kết quả dương tính) hoặc không có phản ứng màu (kết quả âm tính)
- bước cuối cùng là đọc bằng máy đọc (máy quang phổ) nồng độ của kháng thể chống lại Borrelia trong huyết thanh của bệnh nhân.
Xét nghiệm ELISA cho bệnh Lyme được thực hiện từ máu, và trong trường hợp có các triệu chứng thần kinh (neuroborreliosis) cũng từ dịch não tủy.
Không nên xét nghiệm dịch khớp vì có nhiều khả năng kết quả dương tính giả.
Cơ sở để chẩn đoán bệnh là các triệu chứng lâm sàng chỉ ra nó, được xác nhận bằng kết quả của các xét nghiệm trong phòng thí nghiệm.
Việc bổ sung kết quả xét nghiệm trong phòng thí nghiệm không có triệu chứng không cho phép chẩn đoán bệnh Lyme, vì nó đã được chứng minh rằng các kháng thể chống lại Borrelia cũng được phát hiện ở những người khỏe mạnh.
Chẩn đoán huyết thanh học của bệnh Lyme bắt đầu bằng xét nghiệm ELISA sàng lọc bán định lượng. Nếu kết quả là âm tính có nghĩa là chưa phát hiện xoắn khuẩn Borrelia hoặc kết quả là âm tính giả.
Nếu kết quả là dương tính hoặc dương tính yếu (tương đương), nên thực hiện xét nghiệm Western blot khẳng định, được đặc trưng bởi độ đặc hiệu cao, nên được thực hiện.
Điều này nhằm khẳng định tính "trung thực" của các kết quả thu được bằng phương pháp ELISA. Trong quá trình chẩn đoán, bạn không thể bỏ qua bất kỳ bước nào ở trên và ví dụ: thực hiện chẩn đoán bằng phương pháp Western blot ngay lập tức hoặc chẩn đoán chỉ dựa trên kết quả ELISA dương tính.
Ở Ba Lan, việc chẩn đoán bệnh Lyme thường kết thúc ở giai đoạn sàng lọc đầu tiên, điều này gây ra sự hiểu sai về kết quả dương tính hoặc dương tính yếu.
Đề xuất bài viết:
Thử nghiệm chuyển đổi tế bào bạch huyết (LTT) Điều cần biếtKiểm tra ELISA - giá cả. Chi phí xét nghiệm ELISA là bao nhiêu?
Chi phí kiểm tra khoảng 60 PLN và được thực hiện ngay lập tức. Tuy nhiên, bạn có thể đợi khoảng ba tháng để có kết quả của giấy giới thiệu.
Kiểm tra ELISA - kết quả. Chúng có thể là dương tính giả không?
Kết quả dương tính giả là do phản ứng chéo của kháng thể IgM với các protein khác. Các kháng thể do cơ thể tạo ra có thể 'không chính xác' nhận ra kháng nguyên từ các vi sinh vật khác là kháng nguyên Borrelia.
Những “sai lầm” phổ biến nhất xảy ra ở những người bị nhiễm bệnh treponema pallidum (tiếng Latinh: Treponema pallidum), herpesvirus và ở những người mắc bệnh lupus ban đỏ hệ thống và các bệnh thấp khớp khác.
Kiểm tra ELISA - kết quả. Chúng có thể là âm tính giả?
Kết quả âm tính giả có thể xuất hiện ở giai đoạn đầu của nhiễm trùng, trong trường hợp đó, xét nghiệm nên được lặp lại sau khoảng 3-4 tuần. Đây được gọi là cửa sổ huyết thanh học, đó là thời kỳ nhiễm trùng ban đầu mà cơ thể vẫn chưa "quản lý" để tạo ra các kháng thể đặc hiệu.
Điều tương tự cũng áp dụng cho những người bị suy giảm miễn dịch không sản xuất đủ kháng thể.
Một vấn đề lớn, đặc biệt là trong các trường hợp nhiễm trùng rất nặng, là sự xuất hiện của cái gọi là các phức hợp miễn dịch bao gồm các kháng nguyên Borrelia và các kháng thể đặc hiệu cho chúng.
Kết quả là, các kháng thể trở nên "vô hình" đối với các phương pháp thường được sử dụng như ELISA, và mặc dù chúng có trong vật liệu được thử nghiệm, chúng không thể bị phát hiện.
Trong những trường hợp như vậy, phòng thí nghiệm có thể sử dụng cách phá vỡ các phức hợp miễn dịch. Phương pháp điều trị này được thiết kế để giải phóng các kháng thể. Tuy nhiên, phương pháp này không được sử dụng rộng rãi do thiếu tiêu chuẩn hóa trong các phòng thí nghiệm.
Đáng biếtTại sao chẩn đoán bệnh Lyme không dễ dàng?
Điều này là do sự phức tạp của phản ứng miễn dịch chống lại Borrelia và những hạn chế của các phương pháp phòng thí nghiệm. Sự đa dạng của các giống và sự xuất hiện của những loài mới gây nhiễm trùng, đặc biệt là ở lục địa Châu Âu, không tạo điều kiện cho việc phát triển các phương pháp chẩn đoán hiệu quả.
Gần đây, nhiều giống khác đã xuất hiện ở châu Âu, chẳng hạn như Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana và Borrelia spielmanii. Ngoài ra, trong cơ thể, xoắn khuẩn Borrelia có thể biến thành nang hoặc trú ngụ ở những nơi cơ thể không tiếp cận được với các tế bào của hệ miễn dịch.
Do đó, "vô hình" đối với hệ thống miễn dịch. Ngoài ra, nó đã được chứng minh rằng các mô có thể chứa các mảnh vi khuẩn có đặc tính gây viêm mạnh. Chúng được cho là nguyên nhân gây ra các triệu chứng mãn tính của bệnh Lyme, bất chấp kết quả xét nghiệm âm tính trong phòng thí nghiệm.
Văn chương
1. Witecka-Knysz E. và cộng sự Bệnh Lyme: tại sao chẩn đoán lại khó khăn như vậy? Bác sĩ chẩn đoán phòng thí nghiệm tháng 4 năm 2007.
2. Moore A. và cộng sự. Hướng dẫn hiện tại, Cạm bẫy lâm sàng thường gặp và Hướng dẫn tương lai cho chẩn đoán trong phòng thí nghiệm bệnh Lyme, Hoa Kỳ. Khẩn cấp Nhiễm trùng Dis. 2016 Tháng bảy; 22 (7).
3. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm các bệnh do ve gây ra Khuyến nghị của Nhóm công tác: Phòng chẩn đoán phòng thí nghiệm quốc gia, Viện Y tế công cộng-Viện vệ sinh quốc gia, Chuyên gia tư vấn quốc gia trong lĩnh vực bệnh truyền nhiễm, Khoa bệnh truyền nhiễm và nhiễm trùng thần kinh, Đại học Y Białystok, Hội virus học Ba Lan, Warsaw 2014
4. Hosseini S. và cộng sự: Thử nghiệm chất hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA) Từ A đến Z. Springer 2017.
